مبادئ وطرق التحليل الكمي بالكروماتوغرافيا السائلة

تعتمد آلية الفصل للكروماتوغرافيا السائلة على اختلاف تقارب المكونات في الخليط للمرحلتين.

وفقًا للمراحل الثابتة المختلفة، يتم تقسيم كروماتوجرافيا السائل إلى كروماتوجرافيا سائل-صلب، وكروماتوجرافيا سائل-سائل، وكروماتوجرافيا الطور المرتبط.الأكثر استخدامًا هو كروماتوجرافيا السائل والصلب مع هلام السيليكا كحشو وكروماتوجرافيا الطور المستعبد مع ميكروسيليكا كمصفوفة.

وفقا لشكل الطور الثابت، يمكن تقسيم اللوني السائل إلى كروماتوغرافيا العمود، وكروماتوغرافيا الورق، وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.وفقًا لقدرة الامتزاز ، يمكن تقسيمها إلى كروماتوجرافيا الامتزاز وكروماتوجرافيا التقسيم وكروماتوجرافيا التبادل الأيوني وكروماتوجرافيا تخلل الهلام.

في السنوات الأخيرة، تمت إضافة نظام تدفق السائل عالي الضغط إلى نظام كروماتوغرافيا العمود السائل لجعل الطور المتحرك يتدفق بسرعة تحت ضغط عالٍ لتحسين تأثير الفصل، لذلك فإن كروماتوغرافيا السائل عالية الكفاءة (المعروفة أيضًا باسم الضغط العالي) لقد ظهر.

جزء
01 مبدأ التحليل الكمي للكروماتوغرافيا السائلة

للقياس الكمي على أساس المواد النوعية والنقية مطلوبة كمعايير؛

يعد التحديد الكمي للكروماتوغرافيا السائلة طريقة كمية نسبيًا: أي أنه يتم تقدير كمية الحليلة في الخليط من كمية معروفة من العينة القياسية النقية

جزء
02 أسس القياس الكمي بواسطة التحليل الكروماتوغرافي السائل

يتناسب مقدار المكون المقاس (W) مع قيمة الاستجابة (A) (ذروة الارتفاع أو منطقة الذروة)، W=f×A.

عامل التصحيح الكمي (و): هو ثابت التناسب لمعادلة الحساب الكمي، ومعناه الفيزيائي هو مقدار المكون المقاس المتمثل في قيمة استجابة الوحدة (منطقة الذروة).

يمكن الحصول على عامل التصحيح الكمي من الكمية المعروفة للعينة القياسية وقيمة استجابتها.

قياس قيمة استجابة المكون غير المعروف، ويمكن الحصول على مقدار المكون عن طريق عامل التصحيح الكمي.

جزء
03 المصطلحات الشائعة في التحليل الكمي

العينة (العينة): محلول يحتوي على مادة تحليلية للتحليل الكروماتوغرافي.مقسمة إلى عينات قياسية وغير معروفة.

المعيار: منتج نقي ذو تركيز معروف.العينة غير المعروفة (غير معروفة): المخلوط المراد اختبار تركيزه.

وزن العينة: الوزن الأصلي للعينة المراد اختبارها.

التخفيف: عامل التخفيف للعينة غير المعروفة.

المكون : الذروة الكروماتوغرافية التي سيتم تحليلها كميا، أي الحليلة التي يكون محتواها غير معروف.

كمية المكون (الكمية): محتوى (أو تركيز) المادة المراد اختبارها.

التكاملية : العملية الحسابية لقياس منطقة الذروة للذروة الكروماتوغرافية بواسطة الكمبيوتر.

منحنى المعايرة: منحنى خطي لمحتوى المكون مقابل قيمة الاستجابة، يتم إنشاؤه من كمية معروفة من المادة القياسية، ويستخدم لتحديد المحتوى غير المعروف للمادة التحليلية.

جزء
04 التحليل الكمي للكروماتوغرافيا السائلة

1. حدد الطريقة الكروماتوغرافية المناسبة للتحليل الكمي:

l قم بتأكيد ذروة المكون المكتشف وتحقيق دقة (R) أكبر من 1.5

ل تحديد اتساق (نقاوة) القمم الكروماتوغرافية للمكونات المختبرة

ل تحديد حد الكشف والحد الكمي للطريقة؛الحساسية والمدى الخطي

2. إنشاء منحنى المعايرة مع عينات قياسية بتركيزات مختلفة

3. التحقق من دقة ودقة الأساليب الكمية

4. استخدم برنامج إدارة اللوني المطابق لتنفيذ جمع العينات ومعالجة البيانات ونتائج التقرير

جزء
05 تحديد القمم الكمية (النوعية)

تحديد نوعي كل ذروة الكروماتوغرافي ليتم قياسها كميا

أولاً، استخدم العينة القياسية لتحديد وقت الاحتفاظ (Rt) للذروة الكروماتوغرافية التي سيتم قياسها كمياً.من خلال مقارنة وقت الاحتفاظ، ابحث عن المكون المقابل لكل ذروة كروماتوغرافية في العينة غير المعروفة.الطريقة النوعية الكروماتوغرافية هي مقارنة وقت الاستبقاء مع العينة القياسية.المعيار غير كافمزيد من التأكيد (نوعي)

1. طريقة الإضافة القياسية

2. استخدم طرقًا أخرى في نفس الوقت: طرق كروماتوغرافية أخرى (تغيير الآلية، مثل: استخدام أعمدة كروماتوغرافية مختلفة)، كاشفات أخرى (PDA: مقارنة الطيف، البحث في مكتبة الطيف؛ MS: تحليل الطيف الكتلي، البحث في مكتبة الطيف)

3. الأدوات والأساليب الأخرى

جزء
06 تأكيد اتساق الذروة الكمية

تأكيد اتساق الذروة الكروماتوغرافية (النقاء)

تأكد من وجود مكون واحد فقط يتم قياسه تحت كل ذروة كروماتوغرافية

التحقق من وجود تداخل من المواد المصاحبة (الشوائب)

طرق تأكيد اتساق الذروة الكروماتوغرافي (النقاء)

مقارنة الطيفية مع كاشفات مصفوفة الثنائي الضوئي (PDA).

تحديد نقاء الذروة

2996 نظرية زاوية النقاء

الأساليب الكمية شائعة الاستخدام في الجزء 07

طريقة المنحنى القياسي، مقسمة إلى طريقة قياسية خارجية وطريقة قياسية داخلية:

1. الطريقة القياسية الخارجية: الأكثر استخداما في اللوني السائل

تم تحضير سلسلة من العينات القياسية ذات التراكيز المعروفة باستخدام عينات نقية من المركبات ليتم اختبارها كعينات قياسية.يتم حقنه في العمود حتى قيمة الاستجابة الخاصة به (منطقة الذروة).
ضمن نطاق معين، توجد علاقة خطية جيدة بين تركيز العينة القياسية وقيمة الاستجابة، وهي W=f×A، ويتم عمل منحنى قياسي.

في ظل نفس الظروف التجريبية بالضبط، قم بحقن العينة غير المعروفة للحصول على قيمة استجابة المكون المراد قياسه.ومن خلال المعامل المعروف f يمكن الحصول على تركيز المكون المراد قياسه.

مميزات الطريقة القياسية الخارجية:عملية وحساب بسيط، وهي طريقة كمية شائعة الاستخدام؛لا حاجة للكشف عن كل مكون وإزالته؛مطلوب عينة قياسية.ينبغي أن تكون شروط القياس للعينة القياسية والعينة غير المعروفة متسقة؛يجب أن يكون حجم الحقن دقيقًا.

عيوب الطريقة القياسية الخارجية:ويشترط أن تكون الظروف التجريبية عالية، مثل حساسية الكاشف، ومعدل التدفق، ولا يمكن تغيير تركيبة الطور المتحرك؛يجب أن يكون لحجم كل حقنة تكرار جيد.

2. الطريقة القياسية الداخلية: دقيقة ولكنها مزعجة، وهي الأكثر استخدامًا في الطرق القياسية

تتم إضافة كمية معروفة من المعيار الداخلي إلى المعيار لعمل معيار مختلط، ويتم إعداد سلسلة من معايير العمل ذات التركيز المعروف.تبقى النسبة المولية للمعيار إلى المعيار الداخلي في المعيار المختلط دون تغيير.قم بالحقن في العمود الكروماتوغرافي وخذ (منطقة ذروة العينة القياسية/منطقة ذروة العينة القياسية الداخلية) كقيمة الاستجابة.وفقا للعلاقة الخطية بين قيمة الاستجابة وتركيز معيار العمل، أي W= f×A، يتم عمل منحنى قياسي.

تتم إضافة كمية معروفة من المعيار الداخلي إلى العينة غير المعروفة وحقنها في العمود للحصول على قيمة استجابة المكون المراد قياسه.ومن خلال المعامل المعروف f يمكن الحصول على تركيز المكون المراد قياسه.

خصائص الطريقة القياسية الداخلية :أثناء العملية، يتم خلط العينة والمعيار الداخلي معًا وحقنهما في العمود الكروماتوجرافي، فطالما أن نسبة كمية المكون المقاس إلى المعيار الداخلي في المحلول المختلط ثابتة، فإن التغير في حجم العينة لن يؤثر على النتائج الكمية..تعمل الطريقة القياسية الداخلية على تعويض تأثير حجم العينة وحتى الطور المتحرك والكاشف، لذا فهي أكثر دقة من الطريقة القياسية الخارجية.

جزء
08 العوامل المؤثرة على نتائج التحليل الكمي

يمكن أن يكون سبب الدقة الضعيفة هو:

تكامل غير صحيح لمنطقة الذروة، أو تحلل العينة أو الشوائب التي يتم إدخالها أثناء تحضير العينة، أو قارورة العينة غير محكمة الغلق، أو تطاير العينة أو المذيب، أو إعداد العينة بشكل غير صحيح، أو مشاكل في حقن العينة، أو إعداد قياسي داخلي غير صحيح

الأسباب المحتملة لضعف الدقة:

تكامل الذروة غير الصحيح، مشاكل الحقن أو الحاقن، تحلل العينة أو الشوائب التي يتم إدخالها أثناء تحضير العينة، مشاكل كروماتوغرافية، استجابة الكاشف المتدهورة